Xterra色譜柱的啟用（安裝、平衡和柱效測(cè)試）

每一根XTerra™色譜柱都有柱性能測(cè)試報(bào)告Performance Test Chromatogram 和所用填料的分析報(bào)告Certificate of Analysis，填料的分析報(bào)告儲(chǔ)存在色譜柱包裝盒內(nèi)的技術(shù)信息CD上，是所用填料的批次分析報(bào)告，其中包括填料的批號(hào)、填料顆粒鍵合前和鍵合后的分析數(shù)據(jù)、測(cè)試結(jié)果和所用的測(cè)試條件;性能測(cè)試報(bào)告是針對(duì)每根色譜柱的測(cè)試報(bào)告，包括以下信息:填

料批號(hào)、色譜柱序列號(hào)，USP塔板數(shù)、拖尾因子，容量因子以及所用的測(cè)試條件。用戶應(yīng)該儲(chǔ)存這些信息以便在將來(lái)做參考。

a.色譜柱的安裝

  提示:以下的流速適用于4.6mm內(nèi)徑，粒徑為5μm的色譜柱，請(qǐng)根據(jù)色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、填料粒徑以及壓力適當(dāng)?shù)貙?duì)流速進(jìn)行調(diào)節(jié)。請(qǐng)參考第三節(jié)了解如何根據(jù)色譜柱的規(guī)格調(diào)整流速，參考第五節(jié)了解有關(guān)HPLC系統(tǒng)連接的更多信息。

1.沖洗含有任何緩沖鹽的泵系統(tǒng)，將色譜柱入口端連接到進(jìn)樣器的出口端，色譜柱上的箭頭標(biāo)明了流動(dòng)相的流向(先不要接檢測(cè)器)。

2.在0.1mVmin流速條件下用100%甲醇或乙腈沖洗色譜柱，然后在5分鐘內(nèi)將流速升至0.5ml/min。

3.當(dāng)溶液均勻地從柱子出口流出時(shí)，停掉流速，將色譜柱出口端接到檢測(cè)器上(這樣操作可以避免氣泡進(jìn)入檢測(cè)系統(tǒng)，并且可快速達(dá)到基線平衡)。

4.按照步驟2的方法逐漸提高流速。

5.一旦壓力達(dá)到穩(wěn)定值并且基線平衡好后，則進(jìn)入下一步操作。

說(shuō)明:如果流動(dòng)相中含有低濃度的流動(dòng)相改性劑如離子對(duì)試劑，要達(dá)到完全平衡可能需要100倍甚至200倍柱體積的流動(dòng)相:此外，對(duì)于含有甲酸或甲

b.色譜柱平衡

  XTerra™色譜柱是用100%乙腈保存的，在使用其它的流動(dòng)相系統(tǒng)前一定要確保流動(dòng)相和色譜柱內(nèi)溶劑的“相容性"。至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡色譜柱(見(jiàn)表1中不同規(guī)格色譜柱的柱體積數(shù)值)。

為了避免流動(dòng)相中的緩沖鹽在色譜柱或系統(tǒng)中析出，在換上流動(dòng)相之前，需要用5倍柱體積的水與有機(jī)溶劑的混合溶液(將緩沖溶液用水替代，要求有機(jī)溶劑的含量比流動(dòng)相中的含量略低或相等，如在使用60/40的甲醇/緩沖鹽流動(dòng)相之前先用5倍柱體積的60/40甲醇/水溶液沖洗色譜柱)。

c. 測(cè)試色譜柱的柱效

1. 在開始使用色譜柱分析樣品前先測(cè)量色譜柱的柱效，沃特世建議選用合適的待測(cè)物測(cè)試柱效，如采用色譜柱性能測(cè)試報(bào)告中的樣品和條件[加入柱效測(cè)試條件]。

2.計(jì)算塔板數(shù)，用這個(gè)數(shù)據(jù)作為對(duì)照，定期監(jiān)控色譜柱的柱效。

3.隨著色譜柱的使用，需要定期作同樣的測(cè)試以便追蹤色譜柱的性能變化，由于不同儀器的管路連接、操作環(huán)境、系統(tǒng)電路、所使用的溶劑和試劑的質(zhì)量、色譜柱條件以及操作者的技術(shù)都有可能不同，因此在不同的HPLC系統(tǒng)上測(cè)試的結(jié)果可能會(huì)有一些差別。