操作范圍

1. BEH Amide色譜柱可在pH 2~11的HILIC條件下運(yùn)行常規(guī)分析，操作溫度可達(dá)90 °C。

2. 和其他LC色譜柱一樣，在pH、壓力和溫度的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

色譜柱平衡

初次使用本色譜柱時(shí)，用50倍柱體積的60%乙腈:40%水溶液（或初始條件）平衡色譜柱。

初次進(jìn)樣之前，用20倍柱體積的流動(dòng)相（初始條件）平衡色譜柱。

如果采用梯度條件，在進(jìn)樣之間用8~10倍柱體積的流動(dòng)相平衡色譜柱。

色譜柱平衡不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間漂移。

流動(dòng)相注意事項(xiàng)

1. 流動(dòng)相或梯度中應(yīng)始終保持至少3%的極性溶劑（例如3%水、3%甲醇或2%水/1%甲醇等）。

2. 推薦使用含緩沖液的流動(dòng)相而不是添加劑。為獲得理想分析結(jié)果，應(yīng)始終保持緩沖鹽濃度至少為10 mM。

3. 如果要使用添加劑，建議始終保持添加劑濃度至少為0.2%。

4. 流動(dòng)相或梯度中應(yīng)始終保持至少40%的有機(jī)溶劑（例如乙腈）。

5. 水相比例大于60%時(shí)，應(yīng)使用較低的流速，避免柱壓過(guò)高。此要求適用于所有的清洗步驟。

6. 避免在HILIC流動(dòng)相中使用磷酸鹽緩沖液以防止出現(xiàn)析出，但可以使用磷酸。

進(jìn)樣溶劑

1. 如果可能，進(jìn)樣溶劑應(yīng)盡可能接近流動(dòng)相組分（如果是等度分析）或起始梯度條件。除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性套件，否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。

2. 通用的進(jìn)樣溶劑為75:25乙腈/甲醇，該溶劑可以很好地平衡分析物溶解性和峰形。分離在有機(jī)溶劑中溶解度不高的糖類時(shí)，允許樣品中含有濃度較高的水相溶劑。使用50:50乙腈/水可獲得滿意的結(jié)果。

3. 進(jìn)樣溶劑對(duì)峰形的影響應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。在某些情況下，進(jìn)樣水（或高含水量溶液）可能并不會(huì)對(duì)峰形造成不利影響。

其他技巧

1. 初步探索色譜條件時(shí)，可運(yùn)行95%乙腈至50%乙腈的梯度。若無(wú)保留，可運(yùn)行95:3:2乙腈:甲醇:水相緩沖液的等度條件。

2. 可使用諸如甲醇、丙酮或異丙醇之類的極性溶劑代替水以增強(qiáng)保留性能。

3. 確保弱針清洗溶劑/灌注溶劑采用的是起始流動(dòng)相（即高比例有機(jī)相），否則會(huì)對(duì)峰形造成不利影響。典型針清洗條件：800μL強(qiáng)清洗液20:80 ACN/H2O中，500μL弱清洗液75:25 ACN/H2O。

4. 除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性套件，否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。